کیت استخراج پلاسمید

کیت استخراج Plasmid DNA

پلاسمید یک مولکول DNA دو رشته ای دایره ای و خارج کروموزومی است که در زیست شناسی مولکولی برای دستکاری و رمزگشایی اطلاعات ژنتیکی از اهمیت بالایی برخوردار است.

اصطلاح “پلاسمید” اولین بار توسط جوشوا لدربرگ در سال 1592 ابداع شد. باکتری ها می توانند پلاسمیدهای جدیدی را از سایر سلول های باکتریایی و یا از محیط دریافت کنند. آن ها همچنین می توانند به آسانی پلاسمید را از دست بدهند.

برای مثال، وقتی یک باکتری به دو قسمت تقسیم شود، ممکن است یکی از سلول های دختر دریافت پلاسمید از دست بدهد. هر پلاسمید «منشأ همانند سازی» خاص خود را دارد که باعث می شود باکتری میزبان از آن تکثیر (کپی) کند. به همین دلیل، پلاسمیدها می توانند خود را به طور مستقل از کروموزوم باکتریایی کپی کنند، بنابراین می توان نسخه های زیادی از پلاسمید را درون یک سلول باکتریایی تکثیر کرد.

کیت استخراج پلاسمید

پلاسمیدها به باکتری ها برای زنده ماندن کمک می کنند. پلاسمیدها حاوی فقط چند ژن هستند، اما تفاوت زیادی در باکتری میزبان خود ایجاد می کنند.این ژن ها معمولاً برای بقای روز باکتری ها ضروری نیستند، ولی آن ها به باکتری کمک می کنند تا بر اوضاع تنش زای گاه به گاه غلبه کند.

به عنوان مثال، بسیاری از پلاسمیدها حاوی ژن هایی هستند که با بیان آن، باکتری میزبان را در برابر آنتی بیوتیک مقاوم می کنند.

بنابراین وقتی با آن آنتی بیوتیک درمان شود، از بین نمی رود. پلاسمیدهای دیگر حاوی ژن هایی هستند که به میزبان کمک می کنند تا مواد غیرمعمول را هضم کند یا انواع دیگر باکتری ها را از بین ببرد.

همچنین به عنوان مؤلفه های کلیدی در روش های کلون سازی و بیوتکنولوژیک تکامل یافته اند، زیرا دستکاری آن ها ساده تر است. پلاسمیدها در طیف گسترده ای از گونه های باکتریایی (Archae، Eukarya، Eubacteria) یافت می شوند و می توانند به طور مستقل تکثیر شوند.

روش استخراج پلاسمید :

جداسازی DNA پلاسمید از باکتری ها یک روش مهم در زیست شناسی مولکولی است و در بسیاری از مراحل مانند کلونینگ، تعیین توالی DNA ، ترانسفکشن و ژن درمانی یک گام اساسی است.

این دستکاری ها نیاز به جداسازی DNA پلاسمید با خلوص بالا دارند. پلاسمید خالص می تواند برای استفاده فوری در کلیه مراحل زیست شناسی مولکولی استفاده شود.

خالص سازی DNA پلاسمید از DNA باکتری ها با استفاده از روش لیز قلیایی که در زیست شناسی مولکولی برای جدا کردن پلاسمید DNA یا سایر اجزای سلولی مانند پروتئین ها با شکستن سلول ها به کار می رود، انجام می شود. مراحل اساسی جداسازی پلاسمید ایجاد اختلال در ساختار سلولی برای ایجاد لیز، جداسازی پلاسمید از DNA کروموزومی، بقایای سلولی و سایر مواد نامحلول است.

باکتری ها با یک محلول بافر لیز حاوی سدیم ددسیل سولفات (SDS) و هیدروکسید سدیم لیز می شوند.در کیت استخراج پلاسمید از غشاهای میکروفیبرشیشه ای و روش لیز قلیایی استفاده می شود. پلاسمید از سلول باکتریایی آزاد می شود و RNA با کمک آنزیم  RNase از لیز سلولی حذف می گردد.

زواید سلولی و رسوبات نمکی نیز با کمک سانتریفوژ در نهایت حذف می شود. در غلظت نمکی بالا، DNA پلاسمیدی به غشای میکروفیبری ستون متصل می شود. سپس با کمک بافرهای شست و شوی مختلف، آلودگی ها و زواید سلول باکتری حذف می شود و در نهایت به وسیله آب دیونیزه یا بافر با قدرت نمکی پایین، پلاسمید از ستون میکروفیبرخارج شده و در تیوب جمع آوری می شود.

روش انجام کار استخراج پلاسمید :

  1. کشت سلولی با سرعت بالا سانتریفیوژ می شود و مایع رویی دور ریخته می شود.
  2. سوسپانسیون باکتریایی از طریق افزودن بافر P1 به رسوب سلولی ایجاد می شود و به تیوب جدید انتقال می یابد.
  3. بافر P2 اضافه شده و سپس تیوب به آرامی برای 4 دفعه سرو ته می شود. )ورتکس نشود(
  4. بافر P3 اضافه می شود تیوب برای 5-6 بار سرو ته می گردد.
  5. به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ می شود.
  6. سپس سوپرناتانت به ستون کیت انتقال می یابد و سانتریفیوژ به مدت 30 ثانیه انجام می شود. مایع جمع شده در تیوب دور ریخته می شود.
  7. حال بافر P4 اضافه می شود به مدت 30 ثانیه سانتریفیوژ انجام می گیرد، مایع جمع شده دور ریخته می شود.
  8. بافر P5 اضافه می شود و سانتریفیوژ به مدت 30 ثانیه انجام می شود و بازهم ، مایع جمع شده در تیوب دور ریخته می شود.
  9. برای حذف باقی مانده های بافر شستشو به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ می شود.
  10. در نهایت بافر P6 یا آب دیونیزه اضافه می شود، و در دمای اتاق به مدت 1 دقیقه قرار داده می شود و پس از آن سانتریفیوژ نهایی به مدت 1 دقیقه صورت می گیرد.
کیت استخراج پلاسمید

کیت استخراج پلاسمید

خرید کیت استخراج پلاسمید

شرکت بازرگانی ندا شیمی وارد کننده کیت های پلاسمید (Plasmid Kit) از برندهای معتبر و مطرح دنیا می باشد.

فروش کیت استخراج پلاسمید

برای سفارش درخواست های خود می توانید با شماره های ذیل تماس بگیرید.

دفترمرکزی فروش تهران : 44045418 021 (زمان اداری)

واتساپ و تلگرام : 09394453175 (برای استعلام فوری و ان لاین در زمان اداری و غیر اداری)

مدیریت : 09914214699

 

1 پاسخ

دیدگاه ها غیر فعال است.